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细胞计数方法概览 | 尊龙凯时生物医疗解决方案

发布时间:2025-01-28   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在许多生物医学实验和检测中,研究人员需要首先准确计算细胞的数量或密度。这些操作不仅包括细胞培养的维护(如细胞传代),还涵盖定量实验(如qPCR)。细胞计数的方法多种多样,本文将详细介绍这些方法以及它们的优缺点。

细胞计数方法概览 | 尊龙凯时生物医疗解决方案

使用血细胞计数器时,第一步是用70%酒精和镜头纸清洁计数器,然后将盖玻片轻轻放置在计数板上。如果盖玻片放置正确,便可以看到牛顿环现象(同心环状的彩色图案)。接着,使用移液器提取一小部分细胞悬液,并将移液器放在计数板的边缘,让悬液通过毛细作用流入计数室。如果需要检查细胞活性,应在加入计数室前将台盼蓝以1:1的比例混入细胞悬液中。

血细胞计数器是早期专门用于获取准确细胞计数的方法,计数板上设有特殊的网格。通常,大方格为1毫米×1毫米,并进一步划分为005毫米×005毫米的小格子。在计数室的边缘设计上,盖玻片固定在标记网格上方0.1毫米的位置,从而形成已知体积的区域。将显微镜聚焦到计数室的某一特定区域后,使用计数仪进行细胞计数。通常选择1平方毫米(100纳升)的区域,依据细胞的大小和悬液密度使用4倍或10倍物镜进行计数。此过程会在四个不同的1平方毫米区域内重复计算,最后得出平均值。如果检查细胞活性,则活细胞和死细胞应分别计数,死细胞因膜受损而被台盼蓝染成蓝色。

手动计数是一种最经济却最耗时、繁琐的方法,由于易受到人为误差的影响,尤其在多次连续计数时,可靠性较低。此外,频繁计数可能导致眼睛疲劳。若实验室仅需偶尔计数且不需高精度,血细胞计数仪不失为一个不错的选择。然而,在需要频繁计数、提升精度或进行高通量应用时,这种方法则显得不足。手动计数也难以区分悬液中不同类型的细胞,除非这些细胞在大小或形状上存在明显差异。

自动细胞计数仪是手动计数的快速、简便且自动化的替代品。它们基于与血细胞计数仪相同的原理,通过在已知区域内多次计数细胞并计算平均值来完成计数工作。这些设备同样能通过台盼蓝等染料排除法来区分活细胞和死细胞。自动细胞计数仪可以作为独立设备使用,也可连接至计算机。大多数设备除了提供细胞计数外,还能统计细胞的大小等信息。以尊龙凯时品牌为例,其荧光细胞计数仪(例如Luna-FL™双荧光细胞计数仪)能够有效地区分活细胞与死细胞,且使用常见染色剂(如吖啶橙和碘化丙啶)进行细胞计数,特别是在存在非细胞碎片的培养物中表现优异。

自动计数仪的精确性和可靠性使其成为细胞计数和活性检测的理想选择,但在处理形状不规则、极小或非常稀薄的悬液时,可能会面临挑战。对于大多数细胞类型及其应用,自动计数仪提供了高效的计数性能。此外,Coulter计数仪通过测量微通道的电阻变化来完成细胞计数,虽速度较快且能准确计数不同大小的细胞,但不能区分活细胞和死细胞,且对维护要求较高。流式细胞仪则适用于更详细的细胞分析,搭载荧光检测技术,可实现对标记细胞内成分的检测,尽管价格较贵,通常在$40,000至$100,000之间,因此不适合常规细胞计数。

最后,光谱测定方法偶尔用于估算细胞密度,但该方法并不可靠,因为它仅测量透过比色皿的光线吸光度,而非直接计数细胞。培养法是另一种计数方法,适用于形成菌落的细胞(如细菌)。该方法需要稀释细胞悬液后划线至培养皿,并计算菌落的数量以获得原始悬液的细胞密度,但因需等待菌落生长,速度较慢。