在细胞培养的领域，我们通常将细胞分为两种类型：贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞必须附着在培养皿上才能生长，而悬浮细胞则可以在液体培养基中自由漂浮并增殖。表面上看，似乎只有贴壁细胞需要考虑培养皿的表面是否友好，以及是否需要涂覆如胶原蛋白和多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等物质来增强附着力。然而，如果你认为“悬浮细胞就永远不需要涂覆”，那么你可能会被它们飘逸的外观所误导。实际上，在某些关键实验中，悬浮细胞也可能需要暂时“靠岸”，并依赖涂覆表面的支持。接下来，我们将探讨为何悬浮细胞在某些情况下需要涂覆，以及如何正确进行涂覆。

什么是多聚赖氨酸（PLL）涂覆？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种人工合成的阳离子多肽，拥有丰富的氨基基团，并整体带有强正电荷。由于细胞膜表面通常带负电，PLL可以通过静电作用将细胞“吸附”在表面。因此，PLL在以下领域中被广泛应用：

• 初代神经元、干细胞等难以贴壁细胞的培养
• 组织切片或细胞爬片染色的固定
• 增强某些表面抗体或细胞的结合力

在贴壁细胞中，PLL涂覆可以提升细胞的附着速度与均匀性，而在悬浮细胞中，PLL则更多用于短期固定与功能实验的结合。

悬浮细胞需要涂覆的常见场景

以下是一些悬浮细胞需涂覆的常见实验场景：

1. 免疫荧光成像与免疫染色：悬浮细胞在普通培养皿中操作时，容易在洗涤过程中被吸头吸走，影响成像质量。在PLL涂覆的玻片或培养皿中，细胞能够实现短暂的固定，提高图像的稳定性与信噪比。
2. 电转染后细胞收集：电转后的悬浮细胞在恢复期往往很脆弱，直接离心可能会导致大量活细胞的丢失。借助PLL涂覆的板底短暂培养4-6小时，让部分细胞附着后再进行回收，有助于提高后续转染效率和活性细胞比例。
3. 细胞富集或原位功能检测：某些实验，如ELISPOT、细胞毒性检测等，需要在细胞原位观察反应。这类实验对细胞分布及位置的稳定性要求高，因此常需使用PLL或细胞外基质进行涂覆，以固定悬浮细胞。
4. 悬浮细胞低密度培养聚团问题：在低密度培养中，悬浮细胞可能因过于自由漂浮而无法扩增，适当涂覆有助于形成一些“锚点”，减少细胞间的漂浮干扰。
5. 外泌体/病毒收集实验中的细胞定点处理：在外泌体研究中，为保持细胞分泌的稳定性，有时会选择在轻度PLL涂覆条件下固定悬浮细胞，确保上清产物的一致性。

如何正确使用PLL涂覆？

需要强调的是，对悬浮细胞的涂覆并不是为了让其像贴壁细胞一样长期生长。多数情况下，其目的是为了：

• 实验窗口期的短暂固定
• 提高操作效率与成像质量
• 增强细胞在某些实验平台上的一致性

长期附着可能会影响细胞状态，甚至改变其生物学特性，因此应根据实验目的合理设置处理时长和强度。

什么时候不应使用涂覆？

并非所有悬浮细胞实验都需要涂覆。以下情况应避免使用：

• 长期培养的悬浮细胞：例如293F细胞在生物反应器中的培养，不应添加涂覆，而应使用低附着力培养皿，比如聚HEMA处理。
• 需要完全无附着状态的实验：如某些免疫学中的流式功能检测、抗体介导的细胞毒性测试等，涂覆可能会影响结果的真实性。

总结

悬浮细胞并非永远漂浮，它们在某些情况下也需要“靠岸”。不论是为了成像、收集、固定，还是维持操作的稳定性，适当的表面涂覆（如PLL）在关键环节中可以显著提高实验的成功率与数据质量。在生物医疗研究领域，善用尊龙凯时品牌产品和技术方案，能够有效提升实验效果，使每一项研究都能更加精确和高效。